Рпга и рмп в чем разница
Серологическая диагностика сифилиса
Наибольшее значение в лабораторной диагностике сифилиса имеет серологическая диагностика, целью которой является выявление антител к бледной трепонеме. Материалом исследования является сыворотка крови. Забор крови, для анализа на сифилис проводится натощак из локтевой вены. Все современные методы серологической диагностики сифилиса можно разделить на трепонемные и нетрепонемные.
Нетрепонемные тесты реакция Вассермана (реакция Вассермана (RW) имеет более чем столетнюю историю, в настоящее время ее отменили) и реакция микропреципитации определяют антитела к липоидному материалу, высвобождаемому из повреждаемых при сифилисе клеток макроорганизма, а не антитела непосредственно к бледной трепонеме.
Реакция микропреципитации (РМП), микрореакция, экспресс-метод диагностики сифилиса представляет собой реакцию преципитации на стекле. Как и в реакции Вассермана, используется кардиолипиновый антиген. Качественная оценка реакции производится по объему выпавшего осадка, величине хлопьев и так же обозначается в «плюсах». Для получения результата необходимо всего 10-40 минут. РМП несколько превосходит RW по чувствительности, но уступает по специфичности. За рубежом применяются аналоги РМП – RPR и VDRL. Реакция Вассермана и реакция микропреципитации в совокупности образуют комплекс классических серологических реакций (КСР). КСР становятся положительными в середине первичного периода (его деление на серонегативный и серопозитивный как раз и определяется по КСР), во вторичном периоде КСР положительны у 98-100% больных, а при третичном – лишь у 60-70%. То есть, по мере увеличения давности заболевания позитивность КСР постепенно снижается.
Достоинства классических серологических реакций: 1) Дешевизна, простота и быстрота постановки. Особенно это характерно для реакции микропреципитации: РМП в настоящее время – главный скрининговый (отборочный) метод; 2) Нетрепонемные тесты удобно использовать для контроля излеченности сифилиса.
Недостатки классических серологических реакций: 1) Субъективность оценки результатов реакций («на глаз»); 2) Малая чувствительность при поздних формах сифилиса; 3) Главный недостаток нетрепонемных тестов – недостаточная специфичность. При их проведении часто отмечаются ложноположительные реакции (ЛПР).
Ложноположительные реакции могут быть обусловлены перекрестной реактивностью между бледной спирохетой и другими микробами, нарушениями липидного и белкового обмена, нестабильностью клеточных мембран, образованием аутоантител.
При анализе на сифилис ложноположительные реакции отмечаются при острых (малярия, инфекционный мононуклеоз и др.) и хронических (туберкулез, лепра, гепатит, боррелиоз и др.) инфекциях, инфаркте миокарда, циррозе печени, коллагенозах (особенно – при СКВ), онкопатологии, вакцинации, употреблении наркотиков, злоупотреблении алкоголем и жирной пищей. Ложноположительными могут быть КСР в последние недели беременности, после родов, а у некоторых женщин и во время mensis. Ложноотрицательные результаты КСР могут быть связаны с ВИЧ-инфекцией.
Наименее надежным методом диагностики сифилиса является реакция микропреципитации (РМП), которую нельзя применять как единственный метод для обследования доноров, беременных. При установлении диагноза сифилиса также обязательно подтверждение результатов РМП трепонемными тестами.
Трепонемные тесты на сифилис служат для подтверждения результатов нетрепонемных тестов (особенно необходимо при диагностике скрытых форм), а также для выявления сифилиса на ранних стадиях, когда КСР отрицательные.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – наиболее чувствительный метод в серологической диагностике сифилиса.
Специфичность РИФ также весьма высока. Принцип метода: к высушенным и фиксированным ацетоном к стеклу бледным трепонемам добавляется сыворотка крови больного. После промывания препарат обрабатывается сывороткой, содержащей антитела к антителам человека, меченные флюоресцином. Еще раз промывают препарат и смотрят его под люминесцентным микроскопом. Если в исследуемой сыворотке есть противотрепонемные антителафлюоресцины, будет отмечаться желто-зеленое свечение трепонем. Результаты оцениваются по степени свечения и обозначаются в «плюсах» (от + до ++++). РИФ становится положительной в первые дни первичного периода или даже в конце инкубационного периода и остается положительной во всех периодах (в том числе при поздних формах).
У РИФ есть несколько модификаций: РИФ10 более чувствительна, РИФ200 и РИФабс – более специфичны. С ликвором проводят РИФц. ЛПР при постановке РИФ бывают редко (при коллагенозах, боррелиозе).
Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) – наиболее специфичный метод в серологической диагностике сифилиса. Принцип метода: к живым трепонемам, полученным из тканей яичка кролика после искусственного создания специфического орхита, добавляют сыворотку крови исследуемого. При наличии в сыворотке противотрепонемных антител-иммобилизинов, бледные трепонемы прекращают движение (иммобилизируются).
Позитивность РИБТ оценивают при темнопольной микроскопии, исходя из процента трепонем, утративших подвижность: 51-100% – положительная, 31-50% – слабоположительная, 21-30% – сомнительная и 0-20% – отрицательная. Антитела-иммобилизины – поздние антитела, поэтому РИБТ становится положительной лишь в конце первичного – начале вторичного периода сифилиса. В дальнейшем РИБТ остается положительной. Отмечается высокая чувствительность реакции при поздних формах сифилиса.
ЛПР при РИБТ отмечаются редко (при саркоидозе, СКВ, туберкулезе, циррозе печени). Ложноположительный результат РИБТ может быть следствием приема трепонемоцидных антибиотиков, поэтому обследование не проводят лицам, получавшим антибиотики в течение последнего месяца. Достоинствами РИФ и РИБТ являются: 1) Высокая чувствительность (особенно для РИФ); 2) Высокая специфичность (особенно для РИБТ).
Недостатки РИФ и РИБТ: 1) Техническая сложность, дороговизна методов. Особенно сложной является РИБТ, в настоящее время она применяется в основном для научных целей; 2) Субъективность оценки результатов, отсутствие автоматизации; 3) РИФ и РИБТ у больных сифилисом могут оставаться положительными в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение.
Поэтому эти реакции невозможно использовать для контроля излеченности. Исходя из сложности и дороговизны РИФ и РИБТ, имеет смысл применять их для диагностики поздних и скрытых форм сифилиса.
Иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – новые высокочувствительные и высокоспецифичные, удобные в постановке (с возможностью автоматизации), хорошо воспроизводимые, недорогие методы серологической диагностики сифилиса. ИФА по механизму реакции, чувствительности и специфичности близок к РИФ. В обеих реакциях принимают участие одни и те же антитела. При ИФА для визуализации реакции антиген-антитело используют реакцию фермента (щелочная фосфатаза или пероксидаза хрена) с субстратом, который при этом меняет свою окраску. Интенсивность окраски определяет позитивность реакции (от + до ++++). Благодаря автоматизации, этот тест можно применять для скрининга на сифилис больших групп обследуемых: беременных, доноров, больных психоневрологических и кардиологических стационаров и др. Возможна постановка ИФА с ликвором. В настоящее время планируется замена комплекса КСР на сочетание РМП и ИФА.
Результаты ИФА (как и РИФ) становятся положительными в первые дни первичного периода или в конце инкубации и остаются положительными во всех периодах.
При постановке ИФА возможно выявление суммарных антител и дифференцированное определение трепонемоспецифических IgM и IgG. IgM появляются в крови больных лишь в первые недели и месяцы болезни, а затем – исчезают. Поэтому, их выявление при ИФА свидетельствует о наличии ранних нелеченых форм сифилиса, раннего врожденного сифилиса, реинфекции. При выявлении IgG принципиальным является их количество, что отражается с помощью коэффициента позитивности (порядок величин этого показателя варьирует при применении разных тест-систем).
При РПГА в качестве антигена используются заформалиненные эритроциты барана, покрытые антигенами патогенных бледных трепонем. При добавлении к этим эритроцитам сыворотки, содержащей специфические антитела, происходит их агглютинация.
Результаты РПГА оценивают как реактивные, слабореактивные и нереактивные.
Помимо качественного исследования, во всех тест-системах предусмотрен количественный анализ с определением титра. Как и ИФА, РПГА проста в исполнении, не требует высокой квалификации персонала и специального оборудования, возможна ее автоматизация.
РПГА становится положительной уже в инкубационном периоде и может оставаться таковой спустя много лет после выздоровления (не может использоваться для контроля излеченности). По чувствительности и специфичности РПГА не уступает, а при поздних формах и врожденном сифилисе даже превосходит РИФ и РИБТ.
ЛПР при постановке ИФА и РПГА бывают редко и возможны при трепонематозах (фрамбезия, беджель, пинта), коллагенозах, циррозе печени, лимфосаркоме, инфекционном мононуклеозе, лепре, а также у беременных. Ложноотрицательные результаты возможны у ВИЧ-инфицированных пациентов.
Разрабатываются новые высокоспецифичные методы серологической диагностики сифилиса, такие как иммуноблотинг, IgM-серология и др.
Август Пауль фон Вассерман (Wassermann, August von) (1866–1925), немецкий микробиолог и иммунолог.
Родился 21 февраля 1866 в Бамберге. Учился в Страсбургском, Венском и Берлинском университетах, где его учителями были Р.Кох и П.Эрлих. С 1891 – ассистент Института Р.Коха, с 1901 – приват-доцент этого института, с 1902 – профессор. В 1911 Вассерман стал профессором Берлинского университета, в 1913 – директором Института экспериментальной терапии Фридриха Вильгельма в Берлине.
Основные труды ученого посвящены изучению антибактериального и антитоксического иммунитета при холере, тифе, дифтерии. Изучая эпидемию гриппа, Вассерман обнаружил явление относительного иммунитета. Доказал иммунологическую видоспецифичность белков (независимо от П.Уленгута). Предложил методы серологической диагностики туберкулеза.
Значительным достижением Вассермана стала разработка в 1906 (совместно с А.Нейссером и К.Бруном) метода диагностики сифилиса (реакция Вассермана).
Последние годы жизни занимался усовершенствованием серологической диагностики сифилиса, туберкулеза и новообразований.
Умер Август Пауль фон Вассерман в Берлине 16 марта 1925.
Клиника венерологии и дерматологии
Записаться на прием к врачу онлайн
Нажимая на кнопку «отправить заявку», Вы даете согласие на обработку своих персональных данных.
Мы гарантируем анонимность, неразглашение персональных данных и отсутствие рекламных рассылок по указанному вами телефону. Ваши данные необходимы для обеспечения обратной связи и организации записи к специалисту клиники.
Причин по которым пациенты не могут прийти в дерматологическую клинику очень много. Мы не будем их рассматривать, а просто предложим вызвать врача на дом или офис.
Вызвать врача на дом
Нажимая на кнопку «отправить заявку», Вы даете согласие на обработку своих персональных данных.
Мы гарантируем анонимность, неразглашение персональных данных и отсутствие рекламных рассылок по указанному вами телефону. Ваши данные необходимы для обеспечения обратной связи и организации записи к специалисту клиники.
Адрес венерологической клиники где можно пройти обследование, курс лечения, сдать анализы без очередей и анонимно
улица Большая Татарская, дом 35, строение 3
10 минут пешком от станций метро Павелецкая, Новокузнецкая, Третьяковская
Венерология
Дерматология
Микология
Онлайн запись
Все виды анализов
Сдать мазок на половые инфекции:
В любое удобное для вас время вы можете узнать все волнующие вопросы, касающиеся половых инфекций и не только, записавшись на прием к нашим специалистам. Результаты мазка готовы в вашем присутствии.
Сдать анализ крови на СПИД:
Врачи нашей клиники быстро и абсолютно безболезненно возьмут анализ крови, который будет готов в вашем присутствии.
Сдать анализ крови на сифилис:
Пациенты нашей клиники узнают результат анализа на сифилис в течении 10-15 минут.
Сдать анализ крови на гепатит В и С:
Врачи нашей клиники быстро и абсолютно безболезненно возьмут анализ крови на гепатиты В и С.
Сдать анализ крови на ВИЧ:
В течение 10-15 минут в нашей клинике вы можете провериться на ВИЧ и получить заключение врача.
Какие анализы крови сдают на сифилис: RW, РПГА, ИФА, VDRL, RPR, РИБТ, расшифровка результатов тестов
Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.
Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.
Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.
Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.
1. Классификация методов лабораторной диагностики
Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.
Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:
Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.
1.1. Прямые методы
1.2. Непрямые методы
1.3. Гистоморфологические методы
Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.
2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле
Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).
С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.
Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.
Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.
Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).
На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.
В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.
Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.
Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.
3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)
ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.
ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.
Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.
ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.
4. ДНК-гибридизация
ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.
При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.
Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.
Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.
Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».
Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.
5. Заражение лабораторных животных
Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.
Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.
Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.
6. Нетрепонемные тесты
Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.
Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.
Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.
Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:
Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).
7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)
Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.
Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.
При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.
Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.
Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.
8. Реакция микропреципитации
Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).
Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.
Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.
Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).
Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).
9. VDRL
Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).
Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.
Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.
Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.
Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.
Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.
10. РИФ
Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.
РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).
Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.
РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.
11. РИБТ
Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.
Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.
Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:
Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.
12. РПГА
Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).
Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.
При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.
Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.
12.1. Реакция микрогемагглютинации
Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.
13. Иммуноферментный анализ
Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).
Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.
14. Иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.
Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.
15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса
В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.
Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:
Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.
Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.
На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.