Рмп ифа что это
Серологическая диагностика сифилиса
Наибольшее значение в лабораторной диагностике сифилиса имеет серологическая диагностика, целью которой является выявление антител к бледной трепонеме. Материалом исследования является сыворотка крови. Забор крови, для анализа на сифилис проводится натощак из локтевой вены. Все современные методы серологической диагностики сифилиса можно разделить на трепонемные и нетрепонемные.
Нетрепонемные тесты реакция Вассермана (реакция Вассермана (RW) имеет более чем столетнюю историю, в настоящее время ее отменили) и реакция микропреципитации определяют антитела к липоидному материалу, высвобождаемому из повреждаемых при сифилисе клеток макроорганизма, а не антитела непосредственно к бледной трепонеме.
Реакция микропреципитации (РМП), микрореакция, экспресс-метод диагностики сифилиса представляет собой реакцию преципитации на стекле. Как и в реакции Вассермана, используется кардиолипиновый антиген. Качественная оценка реакции производится по объему выпавшего осадка, величине хлопьев и так же обозначается в «плюсах». Для получения результата необходимо всего 10-40 минут. РМП несколько превосходит RW по чувствительности, но уступает по специфичности. За рубежом применяются аналоги РМП – RPR и VDRL. Реакция Вассермана и реакция микропреципитации в совокупности образуют комплекс классических серологических реакций (КСР). КСР становятся положительными в середине первичного периода (его деление на серонегативный и серопозитивный как раз и определяется по КСР), во вторичном периоде КСР положительны у 98-100% больных, а при третичном – лишь у 60-70%. То есть, по мере увеличения давности заболевания позитивность КСР постепенно снижается.
Достоинства классических серологических реакций: 1) Дешевизна, простота и быстрота постановки. Особенно это характерно для реакции микропреципитации: РМП в настоящее время – главный скрининговый (отборочный) метод; 2) Нетрепонемные тесты удобно использовать для контроля излеченности сифилиса.
Недостатки классических серологических реакций: 1) Субъективность оценки результатов реакций («на глаз»); 2) Малая чувствительность при поздних формах сифилиса; 3) Главный недостаток нетрепонемных тестов – недостаточная специфичность. При их проведении часто отмечаются ложноположительные реакции (ЛПР).
Ложноположительные реакции могут быть обусловлены перекрестной реактивностью между бледной спирохетой и другими микробами, нарушениями липидного и белкового обмена, нестабильностью клеточных мембран, образованием аутоантител.
При анализе на сифилис ложноположительные реакции отмечаются при острых (малярия, инфекционный мононуклеоз и др.) и хронических (туберкулез, лепра, гепатит, боррелиоз и др.) инфекциях, инфаркте миокарда, циррозе печени, коллагенозах (особенно – при СКВ), онкопатологии, вакцинации, употреблении наркотиков, злоупотреблении алкоголем и жирной пищей. Ложноположительными могут быть КСР в последние недели беременности, после родов, а у некоторых женщин и во время mensis. Ложноотрицательные результаты КСР могут быть связаны с ВИЧ-инфекцией.
Наименее надежным методом диагностики сифилиса является реакция микропреципитации (РМП), которую нельзя применять как единственный метод для обследования доноров, беременных. При установлении диагноза сифилиса также обязательно подтверждение результатов РМП трепонемными тестами.
Трепонемные тесты на сифилис служат для подтверждения результатов нетрепонемных тестов (особенно необходимо при диагностике скрытых форм), а также для выявления сифилиса на ранних стадиях, когда КСР отрицательные.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – наиболее чувствительный метод в серологической диагностике сифилиса.
Специфичность РИФ также весьма высока. Принцип метода: к высушенным и фиксированным ацетоном к стеклу бледным трепонемам добавляется сыворотка крови больного. После промывания препарат обрабатывается сывороткой, содержащей антитела к антителам человека, меченные флюоресцином. Еще раз промывают препарат и смотрят его под люминесцентным микроскопом. Если в исследуемой сыворотке есть противотрепонемные антителафлюоресцины, будет отмечаться желто-зеленое свечение трепонем. Результаты оцениваются по степени свечения и обозначаются в «плюсах» (от + до ++++). РИФ становится положительной в первые дни первичного периода или даже в конце инкубационного периода и остается положительной во всех периодах (в том числе при поздних формах).
У РИФ есть несколько модификаций: РИФ10 более чувствительна, РИФ200 и РИФабс – более специфичны. С ликвором проводят РИФц. ЛПР при постановке РИФ бывают редко (при коллагенозах, боррелиозе).
Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) – наиболее специфичный метод в серологической диагностике сифилиса. Принцип метода: к живым трепонемам, полученным из тканей яичка кролика после искусственного создания специфического орхита, добавляют сыворотку крови исследуемого. При наличии в сыворотке противотрепонемных антител-иммобилизинов, бледные трепонемы прекращают движение (иммобилизируются).
Позитивность РИБТ оценивают при темнопольной микроскопии, исходя из процента трепонем, утративших подвижность: 51-100% – положительная, 31-50% – слабоположительная, 21-30% – сомнительная и 0-20% – отрицательная. Антитела-иммобилизины – поздние антитела, поэтому РИБТ становится положительной лишь в конце первичного – начале вторичного периода сифилиса. В дальнейшем РИБТ остается положительной. Отмечается высокая чувствительность реакции при поздних формах сифилиса.
ЛПР при РИБТ отмечаются редко (при саркоидозе, СКВ, туберкулезе, циррозе печени). Ложноположительный результат РИБТ может быть следствием приема трепонемоцидных антибиотиков, поэтому обследование не проводят лицам, получавшим антибиотики в течение последнего месяца. Достоинствами РИФ и РИБТ являются: 1) Высокая чувствительность (особенно для РИФ); 2) Высокая специфичность (особенно для РИБТ).
Недостатки РИФ и РИБТ: 1) Техническая сложность, дороговизна методов. Особенно сложной является РИБТ, в настоящее время она применяется в основном для научных целей; 2) Субъективность оценки результатов, отсутствие автоматизации; 3) РИФ и РИБТ у больных сифилисом могут оставаться положительными в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение.
Поэтому эти реакции невозможно использовать для контроля излеченности. Исходя из сложности и дороговизны РИФ и РИБТ, имеет смысл применять их для диагностики поздних и скрытых форм сифилиса.
Иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – новые высокочувствительные и высокоспецифичные, удобные в постановке (с возможностью автоматизации), хорошо воспроизводимые, недорогие методы серологической диагностики сифилиса. ИФА по механизму реакции, чувствительности и специфичности близок к РИФ. В обеих реакциях принимают участие одни и те же антитела. При ИФА для визуализации реакции антиген-антитело используют реакцию фермента (щелочная фосфатаза или пероксидаза хрена) с субстратом, который при этом меняет свою окраску. Интенсивность окраски определяет позитивность реакции (от + до ++++). Благодаря автоматизации, этот тест можно применять для скрининга на сифилис больших групп обследуемых: беременных, доноров, больных психоневрологических и кардиологических стационаров и др. Возможна постановка ИФА с ликвором. В настоящее время планируется замена комплекса КСР на сочетание РМП и ИФА.
Результаты ИФА (как и РИФ) становятся положительными в первые дни первичного периода или в конце инкубации и остаются положительными во всех периодах.
При постановке ИФА возможно выявление суммарных антител и дифференцированное определение трепонемоспецифических IgM и IgG. IgM появляются в крови больных лишь в первые недели и месяцы болезни, а затем – исчезают. Поэтому, их выявление при ИФА свидетельствует о наличии ранних нелеченых форм сифилиса, раннего врожденного сифилиса, реинфекции. При выявлении IgG принципиальным является их количество, что отражается с помощью коэффициента позитивности (порядок величин этого показателя варьирует при применении разных тест-систем).
При РПГА в качестве антигена используются заформалиненные эритроциты барана, покрытые антигенами патогенных бледных трепонем. При добавлении к этим эритроцитам сыворотки, содержащей специфические антитела, происходит их агглютинация.
Результаты РПГА оценивают как реактивные, слабореактивные и нереактивные.
Помимо качественного исследования, во всех тест-системах предусмотрен количественный анализ с определением титра. Как и ИФА, РПГА проста в исполнении, не требует высокой квалификации персонала и специального оборудования, возможна ее автоматизация.
РПГА становится положительной уже в инкубационном периоде и может оставаться таковой спустя много лет после выздоровления (не может использоваться для контроля излеченности). По чувствительности и специфичности РПГА не уступает, а при поздних формах и врожденном сифилисе даже превосходит РИФ и РИБТ.
ЛПР при постановке ИФА и РПГА бывают редко и возможны при трепонематозах (фрамбезия, беджель, пинта), коллагенозах, циррозе печени, лимфосаркоме, инфекционном мононуклеозе, лепре, а также у беременных. Ложноотрицательные результаты возможны у ВИЧ-инфицированных пациентов.
Разрабатываются новые высокоспецифичные методы серологической диагностики сифилиса, такие как иммуноблотинг, IgM-серология и др.
Август Пауль фон Вассерман (Wassermann, August von) (1866–1925), немецкий микробиолог и иммунолог.
Родился 21 февраля 1866 в Бамберге. Учился в Страсбургском, Венском и Берлинском университетах, где его учителями были Р.Кох и П.Эрлих. С 1891 – ассистент Института Р.Коха, с 1901 – приват-доцент этого института, с 1902 – профессор. В 1911 Вассерман стал профессором Берлинского университета, в 1913 – директором Института экспериментальной терапии Фридриха Вильгельма в Берлине.
Основные труды ученого посвящены изучению антибактериального и антитоксического иммунитета при холере, тифе, дифтерии. Изучая эпидемию гриппа, Вассерман обнаружил явление относительного иммунитета. Доказал иммунологическую видоспецифичность белков (независимо от П.Уленгута). Предложил методы серологической диагностики туберкулеза.
Значительным достижением Вассермана стала разработка в 1906 (совместно с А.Нейссером и К.Бруном) метода диагностики сифилиса (реакция Вассермана).
Последние годы жизни занимался усовершенствованием серологической диагностики сифилиса, туберкулеза и новообразований.
Умер Август Пауль фон Вассерман в Берлине 16 марта 1925.
Клиника венерологии и дерматологии
Записаться на прием к врачу онлайн
Нажимая на кнопку «отправить заявку», Вы даете согласие на обработку своих персональных данных.
Мы гарантируем анонимность, неразглашение персональных данных и отсутствие рекламных рассылок по указанному вами телефону. Ваши данные необходимы для обеспечения обратной связи и организации записи к специалисту клиники.
Причин по которым пациенты не могут прийти в дерматологическую клинику очень много. Мы не будем их рассматривать, а просто предложим вызвать врача на дом или офис.
Вызвать врача на дом
Нажимая на кнопку «отправить заявку», Вы даете согласие на обработку своих персональных данных.
Мы гарантируем анонимность, неразглашение персональных данных и отсутствие рекламных рассылок по указанному вами телефону. Ваши данные необходимы для обеспечения обратной связи и организации записи к специалисту клиники.
Адрес венерологической клиники где можно пройти обследование, курс лечения, сдать анализы без очередей и анонимно
улица Большая Татарская, дом 35, строение 3
10 минут пешком от станций метро Павелецкая, Новокузнецкая, Третьяковская
Венерология
Дерматология
Микология
Онлайн запись
Все виды анализов
Сдать мазок на половые инфекции:
В любое удобное для вас время вы можете узнать все волнующие вопросы, касающиеся половых инфекций и не только, записавшись на прием к нашим специалистам. Результаты мазка готовы в вашем присутствии.
Сдать анализ крови на СПИД:
Врачи нашей клиники быстро и абсолютно безболезненно возьмут анализ крови, который будет готов в вашем присутствии.
Сдать анализ крови на сифилис:
Пациенты нашей клиники узнают результат анализа на сифилис в течении 10-15 минут.
Сдать анализ крови на гепатит В и С:
Врачи нашей клиники быстро и абсолютно безболезненно возьмут анализ крови на гепатиты В и С.
Сдать анализ крови на ВИЧ:
В течение 10-15 минут в нашей клинике вы можете провериться на ВИЧ и получить заключение врача.
Какие анализы сдают на сифилис?
Статья (doctor.kz)
Заболевание распространяется не только половым путем, но и при использовании зубной щетки, кухонной посуды, полотенца и других бытовых предметов вместе с больным человеком. Иногда болезнь может протекать бессимптомно (пассивный вид), при этом остается риск заражения окружающих. Сдать анализ на сифилис можно в районной поликлинике и частном врачебном кабинете анонимно. Как называется анализ и где его можно сдать.
Материал для исследования
Наиболее часто для анализа на сифилис используется кровь пациента. Иногда в крови содержатся антитела, вызывающие ложноположительную реакцию.
В таких случаях возможный диагноз может быть подтвержден исследованиями другого биологического материала:
Чтобы узнать, где сдать все анализы на сифилис, нужно обратиться к врачу при первых признаках заболевания. Лабораторные исследования проводятся во многих частных и государственных лабораториях. Сдачу крови на сифилис можно провести в медицинском учреждении или вызвать лаборанта на дом. Должный вид теста определяет врач. Лаборатория проведет тест на сифилис и исследование покажет наличие и отсутствие болезни.
Прямые тесты
Какие анализы сдают на сифилис, этот вопрос часто можно услышать от пациентов. Сегодня существует несколько видов тестов, которые могут показать наличие инфекции в крови. Анализ крови на сифилис, известный как темнопольная микроскопия, является современным методом диагностики с достаточно высокой достоверностью результатов. Исследуемый материал изучается при большом увеличении и специальном подсвечивании образца.
Исследование выявляет наличие бледных трепонем (возбудителя сифилиса) на более темном фоне.
При простом исследовании образца под микроскопом достоверность метода составляет 97% и позволяет обнаружить болезнь у 8 из 10 зараженных. Если анализ крови при сифилисе показывает отрицательный результат, но у пациента имеются ярко выраженные клинические симптомы сифилиса, назначается дополнительное исследование.
Самые точные исследования называются ПЦР анализы на сифилис или полимеразная цепная реакция. Для проведения исследования требуется современное медицинское оборудование и квалифицированные специалисты. Где же можно сдать анализы на сифилис по данному методу? К сожалению, анализ ПЦР могут предложить только частные лаборатории. Ввиду сложности проведения и высокой стоимости анализа, немногие лаборатории предлагают исследование с помощью полимеразной цепной реакции.
В предоставленном образце крови определяется наличие или отсутствие молекул ДНК возбудителя болезни. Достоверность ПЦР на сифилис приближена к 100% и является основой для подтверждения или опровержения диагноза лечащим врачом. Современное молекулярное исследование позволяет обнаружить в исследуемом образце наличие всего двух молекул заболевания. Получить самый точный результат ПЦРа на сифилис можно только при соблюдении всех правил и норм лабораторных исследований. Тест на сифилис может быть готов уже через 5 часов после забора крови. Стоит отметить, что общий анализ крови не выявляет данную инфекцию.
Нетрепонемные исследования
Серологическая диагностика сифилиса предусматривает анализ крови на наличие антител. Существует несколько видов исследований, кровь на которые можно сдать в лаборатории. При проведении медицинских осмотров и обследовании большого количества пациентов назначаются, как правило, один из нетрепонемных (неспецифических) анализов. Если в крови обнаруживаются антитела к сифилису, результат анализа считается положительным. Какие анализы на сифилис следует сдавать пациенту, зависит от клинической картины. На сифилис анализ должен быть назначен квалифицированным врачом.
Реакция Вассермана широко распространенный тест, который может показать заражение на 6 неделе болезни. Другое название исследования или «RW». Для проведения анализа необходимо сдать кровь из вены или пальца натощак. Обычно лаборатории проводят забор крови сутра и рекомендуют пациентам воздерживаться ночь (8–12 часов) от еды и напитков, кроме минеральной воды. Реакция Вассермана определяет заражение по количеству титров антител. Отрицательный результат помечается математическим знаком «минус» (-).
Слабоположительный результат маркируется одним или двумя плюсами (+, ++), положительный тремя плюсами (+++) и четыре плюса (++++) означают резко положительную реакцию.
Также к нетрепонемным методам исследований относится RPR тест. Это исследование считается более современным и точным по отношению к RW анализу. RPR проводится на венозной крови пациента и выявляет наличие антител к фосфолипидам цитоплазматической мембраны. РПР тест можно сделать в частной клинике.
Похожим способом является реакция микропреципитаци, которую используют в современных лабораториях.
Микрореакция преципитации (МРП или ) проводится спустя 4–5 недель после предполагаемого заражения. Для исследования используется капиллярная кровь. Микрореакция на сифилис не относится к точным методам диагностики. Положительная серологическая реакция на сифилис по МРА должна быть подтверждена одним из специфических тестов. Отрицательный результат теста означает начальную стадию или отсутствие заболевания.
Трепонемные исследования
Почему нужно сдавать анализ на сифилис повторно? Часто трепонемные исследования используются в качестве контрольного анализа, чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз после нетрепонемного теста. Сомнительный результат первого теста означает, что придется сдать анализы на сифилис повторно.
Для диагностики болезни на ранних стадиях применяется Реакция иммунофлюоресценции (). Анализ крови из пальца или вены с помощью РИФ может выявить заболевание спустя 1,5–2 месяца после контакта с больным.
Во время проведения антитела четко выделяются свечением в ультрафиолетовом свете.
При беременности или наличии системных заболеваний соединительной ткани (ревматоидный артрит и пр.) может оказаться ложноположительным. Поэтому очень важно предоставить врачу достоверную информацию о себе и медицинскую карту. Положительная реакция обозначается знаками «+» от одного до четырех.
Реакция иммобилизации бледной трепонемы, также известная как пользуется высокой популярностью. Серодиагностика по методу РИБТ достоверна в 99% случаев. Однако анализы крови могут быть назначены только спустя 12 недель после контакта с носителем болезни.
проводится спустя 3,5–4 месяца после возможного заражения. Заболевание определяется с вероятностью 99%.
Иммуноблотинг способен дать 100% результат и реагирует даже на очень маленькое содержание антител в крови пациента.
Иммуноферментный анализ или ИФА способен выявить болезнь уже спустя 3 недели после возможного заражения. Достоверность положительного результата составляет 98%. Этот анализ называют одним из самых точных. Как же очистить кровь от сифилиса? Как лечат сифилис какие нужны повторные обследования скажет квалифицированный врач. Не занимайтесь самолечением!
Может называться и выглядеть в зависимости от производителя, например, или «Профитест». Тест для самодиагностики не предоставит развернутый анализ, но поможет определить наличие или отсутствие болезни с вероятностью более 98% (при условии, что тест проведен правильно).
Набор РМП на сифилис состоит из пластиковой формы с тестовой полоской, острого инструмента для прокалывания кожи на пальце, одноразовой пластиковой пипетки, бутылочки с раствором для разведения крови и подробной инструкции на русском языке. Перед проведением анализа нужно придерживаться тех же правил, что и в медучреждении, очищать руки и поверхность стола перед работой.
Подтвердить или опровергнуть результаты домашнего теста может серодиагностика.
Стоит отметить, что тест может показать положительный результат и уже после успешного лечения сифилиса. Все дело в том, что организм помнит о перенесенной инфекции еще несколько лет и продолжает вырабатывать антитела к сифилису. Однако количество этих антител постепенно снижается, и при отсутствии повторного заражения перестают вырабатываться в среднем в течение 2–3 лет после успешного лечения. Однако некоторые факторы могут замедлять этот процесс. К ним относится прием алкоголя и наркотических средств. Поэтому задумываясь, как очистить кровь после сифилиса, в первую очередь откажитесь от вредных привычек.
Лечение
Как избавиться от сифилиса и какое лечение нужно пройти? Сразу стоит отметить, что лечение должен назначать только опытный врач. Терапия от сифилиса проводится с помощью антибиотиков в течение долгого времени. Чтобы кровь очистилась от антител нужно не менее 2 лет. Кровь очищается медленно и постепенно. То есть после полученного лечения антитела вырабатываются все меньше и в конце концов перестают определяться в крови. Чтобы контролировать этот процесс пациентам приходится сдавить анализы в течение 3 лет.
Исследование крови на сифилис обязательно для людей многих профессий (врачи, военные, повара и пр.) для получения допуска к работе. В таком случае постоянно, при каждом медосмотре, будет назначена серология или другой тип анализа. При беременности также обязательно проводится исследование на сифилис, анализы назначает врач. Некоторые типы анализов, например РИФ, часто бывает ложноположительным. Какие сегодня самые точные анализы на сифилис, вам подскажет врач.
Хотите читать всё самое интересное о красоте и здоровье, подпишитесь на рассылку!
Понравился материал? Будем благодарны за репосты
Рмп ифа что это
ГБУЗ «Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения Москвы», Москва, Россия, 119071
Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова
Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения Москвы, Москва, Россия, 119071
Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения Москвы, Москва, Россия, 119071
Проблемы серологической диагностики сифилиса. Интерпретация результатов серологических исследований
Журнал: Клиническая дерматология и венерология. 2016;15(1): 60-68
Фриго Н. В., Жукова О. В., Пташинский Р. И., Негашева Е. С. Проблемы серологической диагностики сифилиса. Интерпретация результатов серологических исследований. Клиническая дерматология и венерология. 2016;15(1):60-68.
Frigo N V, Zhukova O V, Ptashinskiĭ R I, Negasheva E S. Issues of serological diagnosis of syphilis. Interpretation of the results of serological tests. Klinicheskaya Dermatologiya i Venerologiya. 2016;15(1):60-68.
https://doi.org/10.17116/klinderma201615160-68
ГБУЗ «Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения Москвы», Москва, Россия, 119071
Серологическая диагностика сифилиса в настоящее время наиболее востребована, и включает спектр разнообразных методов исследования. Однако при их использовании возникает ряд проблем, нередко ставящих в тупик дерматовенерологов. Среди них можно выделить три основные группы: ошибки диагностики, допускаемые на различных этапах выполнения исследования; ложноположительные или биологические ложноположительные, реакции; несовпадение результатов отдельных исследований. В статье рассматриваются вопросы, касающиеся существующих проблем серологической диагностики сифилиса; приводятся варианты сочетаний нетрепонемных и трепонемных тестов, дается разбор ряда клинических ситуаций при диагностике сифилиса методами иммуноферментного анализа и реакции микропреципитации, наиболее часто используемыми в повседневной серологической практике.
ГБУЗ «Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения Москвы», Москва, Россия, 119071
Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова
Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения Москвы, Москва, Россия, 119071
Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии Департамента здравоохранения Москвы, Москва, Россия, 119071
Динамика антителообразования при сифилисе.
Несмотря на тенденцию к снижению заболеваемости сифилисом в Российской Федерации, проблема эпидемиологии заболевания сохраняет актуальность. Отмечается преобладание скрытых форм, регистрируются случаи врожденного сифилиса, растет число случаев нейросифилиса как в России в целом, так и в отдельных субъектах, в том числе в Москве [1].
Значимое место в контроле над распространением сифилитической инфекции занимает диагностика, осуществляемая лабораторными методами. Она особенно важна при скрытых формах заболевания, при необходимости раннего установления диагноза, предупреждения развития врожденного сифилиса, а также поздних форм инфекции.
В России в настоящее время абсолютный приоритет в диагностике сифилиса занимают серологические методы исследования, среди которых выделяют нетрепонемные (НТТ) и трепонемные (ТТ) тесты.
Все современные НТТ представляют собой флоккуляционные тесты, в качестве антигена в которых применяют кардиолипин-лецитин-холестероловый комплекс, представляющий собой антиген нетрепонемного происхождения.
НТТ — реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой (РМП), тест быстрых плазменных реагинов (RPR), тест исследовательской лаборатории венерических заболеваний (VDRL) и др. — применяют для скрининга населения на сифилис, контроля эффективности терапии (по титру антител в парных сыворотках, полученных до и после лечения) и определения активности инфекции (по высоте титра антител).
В ТТ применяют антиген трепонемного происхождения — патогенную бледную трепонему как цельноклеточную, так и в виде рекомбинантных белков или синтетических пептидов.
Современные ТТ — иммуноферментный анализ (ИФА), реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) и ее аналоги, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноблоттинг (ИБ), иммунохемилюминесценцию (ИХЛ), простые быстрые тесты у постели больного (ПБТ), реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) — применяют для подтверждения положительных результатов НТТ и скрининга населения на сифилис (ИФА, РПГА, простые быстрые тесты).
Поскольку серологическая диагностика сифилиса является в настоящее время наиболее востребованной и включает спектр разнообразных методов исследования, при их использовании возникает ряд проблем, нередко ставящих в тупик дерматовенерологов. Среди них можно выделить три основные группы:
1. ошибки диагностики, допускаемые на различных этапах выполнения исследования;
2. ложноположительные (ЛПР) или биологические ложноположительные реакции (БЛПР);
3. несовпадение результатов отдельных исследований.
Ошибки, допускаемые на преаналитическом этапе, могут быть связаны с неправильной подготовкой больного к исследованию или с тестированием сывороток крови, не пригодных к исследованию.
Запрещается использовать для исследования сыворотки крови с признаками гемолиза, бактериального пророста, а также хилезные (жирные, молочно-белого цвета) сыворотки, так как их исследование может привести к ложным результатам.
— низкая квалификация сотрудников лаборатории и несоблюдение инструкций по применению наборов реагентов;
— отсутствие внутрилабораторного контроля качества исследований и практики внешнего контроля качества исследований в лаборатории;
— неправильное хранение биологического материала (сыворотки крови до исследования на сифилис должны храниться в условиях бытового холодильника при температуре 4–8°С не более 74 ч; более длительное хранение возможно при температуре –15°С и ниже; при этом допускается лишь однократное замораживание/размораживание замерзших сывороток крови перед исследованием);
— неправильное хранение наборов реагентов до проведения исследования — на наборах реагентов (в инструкциях или коробках для наборов) указывается срок годности, условия хранения (в условиях бытового холодильника, при комнатной температуре, замороженными при низкой температуре). Нарушение этих условий приводит к порче наборов и потере диагностической активности.
Критичными факторами, приводящими к возникновению ошибок на постаналитическом этапе 3 исследования, являются:
— низкий уровень подготовки работников клиники, которые не знают о современных тестах на сифилис и не умеют их правильно интерпретировать;
— отсутствие или низкое качество системы менеджмента качества в учреждении, когда возможны ошибки вследствие неправильной маркировки пробирок, неправильного заполнения бланков с результатами исследований, ошибки при занесении результатов исследований в лабораторный журнал, историю болезни или амбулаторную карту, утрата результатов исследований.
ЛПР или БЛПР могут быть связаны с низким качеством диагностикумов (низкой чувствительностью и специфичностью), но могут быть также обусловлены и другими причинами.
Одной из вероятных причин ложноположительных тестов на сифилис являются технические погрешности, сопровождающие сбор, доставку, хранение образцов сыворотки крови и постановку серологических реакций на сифилис; нарушения, связанные с хранением ингредиентов реакций, несоблюдением инструкций при выполнении исследований и работе на соответствующем оборудовании.
БЛПР, регистрируемые у лиц, не страдающих сифилисом, с помощью НТТ, возможны при ВИЧ-инфекции, гепатите C, беременности, в пожилом возрасте пациентов, при тяжелой соматической патологии (в том числе эндокринной, онкопатологии, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, легких, при некоторых дерматозах) [8—16].
БЛПР можно разделить на острые (регистрируются в сроки до 6 мес с момента выявления) и хронические (более 6 мес). Острые БЛПР наблюдаются, как правило, при острых инфекциях вирусной и бактериальной природы, после вакцинации. Хронические БЛПР могут наблюдаться при заболеваниях аутоиммунной, эндокринной природы, онкологических процессах, лепре, хронических заболеваниях печени, других (как правило, хронических) заболеваниях, при инъекционном применении наркотиков, в старческом возрасте.
ЛПР обнаруживаются также при эндемичных трепонематозах и спирохетозах. Однако эти случаи вряд ли можно отнести к «ложноположительным». Трепонематозы и спирохетозы вызываются бактериями, относящимися к группе спирохет, включающей Borrelia, Spirochaeta, Leptospira, Treponemа pertenue (фрамбезия/фрамбезия тропическая), T. carateum (пинта), Т. pallidum подвид endemicum (беджель). Антитела к возбудителям при этих заболеваниях по своему составу близки к антителам к T. рallidum и определяются теми же методами [17].
Для дифференциации ложного и истинного характера серопозитивности НТТ применяются ТТ.
Однако серологические ЛПР на сифилис могут наблюдаться и при постановке Т.Т. Так, положительные результаты ИФА и РПГА отмечены у пациентов с инфекционным мононуклеозом, у наркоманов, больных коллагенозами, у лиц со злокачественными новообразованиями, у пациентов с эндокринной патологией. В этих случаях отличить истинные реакции и ложные бывает затруднительно, потому что сифилис может сочетаться с вышеперечисленными заболеваниями. Положительные результаты ТТ могут также наблюдаться у пациентов пожилого возраста [18—21].
Для дифференциальной диагностики между БЛПР и ранним скрытым сифилисом (РСС) могут быть использованы следующие подходы:
— проведение комплекса лабораторных исследований (НТТ, несколько ТТ);
— получение полноценных сведений о пациенте и его половых партнерах, включая не только клинико-анамнестические, но и социально-эпидемиологические данные;
— проведение новых, высокотехнологичных исследований.
Для дифференциальной диагностики между БЛПР и РСС могут быть использованы дифференциально-диагностические критерии, включающие как серологические и клинико-анамнестические показатели, так и социально-эпидемиологическую характеристику пациентов [22].
Так, для БЛПР более характерна регистрация низких титров НТТ (≤1:4), отрицательные или слабоположительные результаты ТТ, колебания значений тестов при их повторении в одной лаборатории, спонтанное (без антибиотикотерапии) снижение титров или негативация серореакций; из клинико-анамнестических показателей — отсутствие анамнестических указаний на высыпания в области гениталий в пределах 2 лет до обращения, отсутствие увеличенных паховых лимфоузлов, отсутствие указаний на сифилис и объективных данных, свидетельствующих о сифилисе у полового партнера; из социально-эпидемиологических показателей — возраст пациентов старше 40 лет, наличие соматической патологии, поздний сексуальный дебют (после 20—25 лет), моногамные половые отношения, наличие постоянной работы.
Для больных РСС более характерны высокие титры НТТ (≥1:8), резко положительные результаты ТТ в полном комплексе, стабильные (положительные) значения тестов, снижение титров или негативация серореакций после специфической терапии; из клинико-анамнестических показателей — анамнестические указания на высыпания в области гениталий в пределах 2 лет до обращения, наличие увеличенных паховых лимфоузлов (чаще одностороннее), данные конфронтации — половой контакт с больным сифилисом; из социально-эпидемиологических показателей — возраст пациентов моложе 20 лет, отсутствие соматической патологии, ранний (до 13—15 лет и раньше) сексуальный дебют, беспорядочные половые связи, множество половых партнеров, отсутствие постоянной работы.
Несовпадение результатов отдельных исследований . Данная проблема волнует дерматовенерологов достаточно давно, и связана в первую очередь с комплексностью серодиагностики сифилиса. В особенности же она обострилась после того как в практику дерматовенерологических учреждений стали внедрять реверсионный алгоритм диагностики сифилиса, начинающийся с использования ТТ (в отличие от традиционного алгоритма, начинающегося с НТТ) [23]. При этом появилась масса необъяснимых случаев с расхождением результатов отдельных тестов. В основном же это касалось случаев с положительными результатами ТТ и с отрицательными НТТ, которые регистрировались среди категорий пациентов, не относящихся к так называемым «ядерным» 4 группам (соматические больные, беременные, доноры).
Так чем же может быть обусловлено расхождение результатов серологических тестов?
Одной из причин расхождения результатов серологических реакций на сифилис могут быть различия сроков их позитивации и негативации, связанные с особенностями развития иммунного ответа при сифилисе (рисунок).
Как известно, первыми в крови больных сифилисом начинают обнаруживаться трепонемоспецифические антитела, относящиеся к IgМ. Они появляются в рамках развития первичного иммунного ответа, начиная со 2-й недели после заражения, могут регистрироваться уже в периоде инкубации, далее их количество нарастает, достигая максимума на 6—9-й неделе после заражения, после чего постепенно падает [24—26]. Трепонемоспецифические IgM регистрируются в таких реакциях, как ИФАIgM, РИФIgM, 19SIgM-FTAabs, IgM-иммуноблоттинг.
Трепонемоспецифические IgG начинают появляться в крови больного сифилисом примерно с 4-й недели после заражения. Количество их достигает максимума при вторичном сифилисе, а также при РСС, и может оставаться на высоком уровне в течение всей оставшейся жизни пациента, когда-либо перенесшего сифилис, что служит основанием для ретроспективной диагностики сифилиса. Трепонемоспецифические IgG определяются в таких реакциях, как ИФАIgG, IgG-иммуноблоттинг, РПГА, РИТ, РИФ.
РИБТ — один из старейших, «классических» тестов сифилидологии, до сих пор используемый в России, становится позитивным примерно со второй половины первичного периода сифилиса и далее может остаться положительным всю оставшуюся жизнь у пациента, перенесшего сифилис, в особенности начиная со вторичной стадии [27].
Антитела, определяемые в НТТ (антитела против липоидных антигенов бледной трепонемы), также как и в РИБТ, определяются в крови со второй половины первичного периода сифилиса; их концентрация достигает максимума при вторичном и РСС, а далее, при продвижении сифилиса к поздним стадиям (третичный, висцеральный, поздний нейросифилис), могут спонтанно элиминироваться, а НТТ — стать отрицательными.
В этой связи нет ничего удивительного в том, что результаты отдельных серологических тестов на разных стадиях сифилитической инфекции могут не совпадать.
Существует эффект (или период) так называемого серологического окна, известный для многих инфекций [28, 29]. При сифилисе он включает период инкубации и начала первичного сифилиса, когда твердый шанкр в виде эрозии или язвы уже появился, а серологические реакции, регистрирующие наличие антител-реагинов к липоидным антигенам бледной трепонемы, еще отрицательные. Однако положительными при этом могут быть другие трепонемные «ранние» реакции, в частности, ИФАIgM, РИФIgM, 19SIgM-FTAabs, IgM-иммуноблоттинг, а также (у некоторых пациентов) — РИФ.
Известен так называемый феномен, или эффект прозоны, когда у больного с «цветущим» сифилисом (вторичный, РСС) наблюдается отрицательный результат серологических реакций на сифилис (в частности, НТТ) ввиду конкуренции антител с разной валентностью за сайты связывания с антигеном; при этом может наблюдаться блокада антигенных детерминант и парадоксально отрицательный результат реакции [30—35]. Выходом из данной ситуации является разведение сыворотки крови и ее повторное тестирование в разведениях (титры).
Отрицательные результаты серологических тестов (всех или частично) на сифилис могут быть обусловлены иммуносупрессией, сопровождающей ВИЧ-инфекцию, а также другие заболевания/состояния, связанные с развитием иммуносупрессии (например, получение больным химиотерапии по поводу онкологического заболевания) [36]. Выход в данной ситуации заключается в подробном изучении анамнеза пациента, их обследовании на ВИЧ-инфекцию, постановке более чувствительных серологических реакций и применении прямых методов исследования.
Наконец, несовпадение результатов серологических реакций может наблюдаться ввиду разной природы и состава входящих в них антигенов и соответственно определяемых антител. Так, например, в НТТ мы определяем антитела к кардиолипиновому антигену — антифосфолипидные иммуноглобулины, в ИФА — антитела к антигенам белковой природы или липопротеинам. При одновременной постановке результаты исследований в разных реакциях могут не совпадать.
Варианты сочетаний нетрепонемных и трепонемных серологических тестов
В клинической практике могут встречаться различные сочетания результатов НТТ и ТТ, интерпретация которых иногда вызывают затруднение.
Итак, классические сочетания. Когда это может наблюдаться?
НТТ — отрицательный, ТТ — положительный. Такое сочетание значений тестов может наблюдаться:
— в начале первичного периода сифилиса — в период «серологического окна», т. е. в первые 2—3 нед после появления твердого шанкра, когда НТТ еще не позитивировались, а ТТ (в особенности IgM-варианты тестов) уже положительные;
— в случае позднего нелеченного сифилиса, если НТТ спонтанно негативировались (это происходит в 20—40% случаев);
— при раннем сифилисе, успешно пролеченном (может наблюдаться всю оставшуюся жизнь пациента, в особенности, если он получал лечение по поводу сифилиса вторичного или РСС);
— при ложноположительном результате ТТ; в этом случае наблюдается, как правило, низкий уровень серопозитивности ТТ; следует повторить исследование в той же лаборатории с той же тест-системой.
НТТ и ТТ положительные. Казалось бы, это совершенно понятная ситуация, свидетельствующая о наличии у пациента сифилиса. Однако возможны и другие варианты. Данная ситуация также может наблюдаться:
— после получения больным сифилисом адекватного лечения раннего сифилиса (в пределах 1—1,5 лет после окончания лечения сифилиса, как правило, при замедленной негативации серологических реакций), но может сохраняться и всю оставшуюся жизнь пациента, в особенности, если он получал лечение по поводу сифилиса вторичного или РСС;
— в случае пролеченного позднего сифилиса (серологические реакции при этом могут навсегда остаться положительными);
— при трепонематозах и спирохетозах (пинта, педжель, боррелиоз, возвратный тиф), если инфекции вызваны возбудителями, имеющими антигенное сходство с T. pallidum;
— в случае регистрации ложноположительных результатов серологических реакций (злокачественные новообразования, аутоиммунные заболевания, заболевания желудочно-кишечного тракта, тяжелые хронические инфекции); при этом регистрируют, как правило, низкие титры серореакций, но могут быть и высокие.
НТТ — положительный, ТТ — отрицательный. Как правило, это классическая ситуация для ложноположительных результатов НТТ на сифилис. Вместе с тем такое сочетание возможно при первичном сифилисе (когда использовался IgG вариант ТТ, например, РПГА, РИБТ, которые еще не успели позитивироваться) и в случае пролеченного сифилиса при низкой концентрации антитрепонемных антител.
НТТ и ТТ отрицательные. Данная ситуация может наблюдаться:
— если пациент никогда не болел сифилисом;
— в период инкубации и в начале первичного периода сифилиса;
— при сифилисе у пациента с выраженной иммуносупрессией (ВИЧ-инфекция, предшествующая химиотерапия по поводу злокачественного новообразования);
— в случае эффекта «прозоны» у больного вторичным, РСС (множество антител, конкурирующих за сайты связывания с антигеном);
— пациент получил лечение по поводу первичного сифилиса.
Клинические ситуации при диагностике сифилиса методами ИФА и РМП
Практика показывает, что в Российской Федерации для диагностики сифилиса наиболее часто применяют технологию ИФА в сочетании с НТТ (РМП, RPR). Это обусловлено наличием большого выбора ИФА-тест-систем, предлагаемых отечественными и зарубежными производителями, удобством проведения исследований методом ИФА «на потоке», в крупных лабораториях (централизованных и лабораториях кожно-венерологических диспансеров). Вместе с тем использование различных вариантов ИФА (с определением суммарных антител ИФАсат, а также ИФА-IgM, ИФА-IgG) нередко приводит к трудностям в интерпретации получаемых результатов. Поэтому остановимся на наиболее часто встречающихся ситуациях.
Начальный период сифилитической инфекции. В ранней стадии инфекции (инкубация, начало первичного сифилиса) у пациентов может быть зарегистрирована как положительная (как правило, в низком титре), так и отрицательная РМП, позитивный результат определения суммарных антител (САТ) и IgM методом ИФА. Результат определения IgG-антител может быть при этом положительным в низком титре (с низким коэффициентом позитивности), либо отрицательным. Результаты серологического тестирования при этом могут выглядеть следующим образом: РМП ±, ИФАсат +; М+; G ±.
Начальный период сифилитической инфекции характеризуется, как правило, выработкой «ранних» трепонемоспецифических IgM-антител и может быть пропущен при отрицательном результате РМП и отсутствии должной настороженности со стороны дерматовенеролога. Важным моментом, позволяющим избежать ошибку, может стать постановка ИФА по клинико-эпидемиологическим показаниям (указание на половой контакт с больным заразной формой сифилиса, наличие первичного аффекта), а также повторение исследования через 5—7 дней с новой порцией крови. Воспроизведение полученных результатов либо позитивация РМП и IgG–ИФА будут в этом случае дополнительным подтверждением в пользу сифилиса.
Период «разгара» инфекции . Имеется в виду вторичный сифилис, когда в крови больного сифилисом регистрируют антитела, определяемые в ТТ и НТТ. Как правило, этот период сомнений не вызывает, сопровождается клиническими проявлениями и следующей серологической картиной: РМП+; ИФАсат +; М+; G+.
При недостаточно высокой чувствительности ИФА-IgM-тест-систем могут наблюдаться следующие результаты серологических тестов: РМП+; ИФАсат +; М–; G+.
В редких случаях при переизбытке антител, может наблюдаться «феномен прозоны» — парадоксально отрицательный результат, как правило, НТТ. В этом случае может быть получен следующий вариант серологического тестирования: РМП–; ИФАсат +; М+; G+.
В такой ситуации следует поставить РМП в разведениях сыворотки крови с определением титра.
Дифференциальная диагностика РСС и БЛПР. Наиболее трудным для диагностики, особенно при отсутствии манифестных проявлений инфекции, низких титрах РМП, низком коэффициенте позитивности ИФАсат, отрицательном IgM-ИФА, а также невозможности тестирования на содержание IgG-АТ и «отрицательном» (в плане сифилиса) анамнезе пациентов является следующее сочетание результатов: РМП+; ИФАсат+; М–; G+.
В данном случае должна осуществляться дифференциальная диагностика между РСС и БЛПР. Диагностическим для РСС при этом будет высокий титр трепонемоспецифических IgG (≥1:1600) [22]. Существенную помощь при установлении диагноза могут оказать клинико-анамнестические данные.
Поздний сифилис. Ретроспективный диагноз. В позднем периоде инфекции РМП может быть отрицательной, слабоположительной, либо положительной в низком титре; ИФА же, напротив, обычно бывает положительным. При этом мы вправе ожидать позитивных результатов при определении методом ИФА суммарных антител, а также IgG в высоком титре или с высоким коэффициентом позитивности. Уровень IgM-антител с переходом инфекции в позднюю стадию, как правило, падает, в связи с чем ожидаемым будет следующее сочетание: РМП–; ИФАсат+; М–; G+, высокий титр (высокий коэффициент позитивности).
Аналогичная комбинация результатов исследований может наблюдаться и в случае леченного сифилиса, при необходимости подтвердить ретроспективный диагноз. Вместе с тем ввиду проведенного лечения титры IgG (и коэффициент позитивности) могут быть средними или низкими, либо вообще реакция на IgG-антитела будет отрицательной. Ожидаемый результат при этом будет выглядеть следующим образом: РМП–; ИФАсат±; М–; G± (средний, низкий титр или коэффициент позитивности).
Ранний врожденный сифилис. ЛПР новорожденных. Классическая комбинация результатов серореакций при раннем врожденном сифилисе будет следующей:
РМП+; ИФАсат+; М+; G+ (M и G-высокий титр или коэффициент позитивности)
Ввиду недостаточной чувствительности тест-систем, выявляющих IgM-антитела, результат их определения может оказаться отрицательным, что еще не исключает ранний врожденный сифилис у ребенка. Помочь в установлении диагноза при этом могут результаты определения титров IgG-антител в динамике и сопоставление результатов обследования ребенка с результатами матери [38].
Высокие титры РМП и IgG—ИФА без тенденции к снижению в течение ближайших 6 мес после родов, превышающие аналогичные показатели матери, свидетельствуют в пользу раннего врожденного сифилиса. Комбинация результатов при этом может выглядеть следующим образом: РМП+; ИФАсат+; М–; G+ (высокий титр или коэффициент позитивности без тенденции к снижению в течение 6 мес после рождения, титры антител у ребенка выше, чем у матери).
Низкие титры или слабоположительные результаты РМП наряду с отрицательными данными IgM-ИФА, низким титром или низким коэффициентом позитивности IgG—ИФА, сопровождающимися спонтанной негативацией в течение 6 мес после родов и более низкими значениями, чем у матери, свидетельствуют в пользу ложной позитивности серореакций у ребенка. Комбинация результатов при этом будет выглядеть следующим образом: РМП+(слабо+; низкие титры); ИФАсат+; М–; G+ (низкие титры, низкий коэффициент позитивности; спонтанная негативация РМП в течение 6 мес. после рождения; титры АТ у ребенка ниже, чем у матери).
Рецидив, реинфекция. Возникновение клинико-серологического, либо только серологического рецидива после пролеченной инфекции сопровождается возвратом прежних симптомов, к числу которых относится прежде всего положительная сероконверсия. Комбинация результатов серореакций при этом выглядит следующим образом: РМП+; ИФАсат+; М–; G+ — рецидив.
В случае реинфекции картина скорее всего будет следующей: РМП+; ИФАсат+; М+; G+ — реинфекция.
Дифференцировать рецидив и реинфекцию можно на основании клинико-анамнестических и серологических критериев (таблица).
Клинико-анамнестические и серологические критерии дифференциальной диагностики рецидива и реинфекции
Клинико-серологический контроль после лечения сифилиса . Основным критерием качества терапии сифилиса в настоящее время является интенсивность снижения титров РМП в течение первого года наблюдения [23]. Об эффективности терапии свидетельствует 4-кратное снижение титров РМП в сравнении с первоначальными (до лечения) данными. Результаты ИФА при этом не учитываются.
Об удовлетворительных результатах лечения могут говорить следующие сочетания:
Комбинация: РМП+; ИФАсат+; М–; G+ у леченного пациента с постепенным снижением титров РМП (в течение 1,5—2 лет после лечения) говорит в пользу замедленной негативации серореакций и целесообразности наблюдения за больным без активного вмешательства в его судьбу (т.е. без дополнительного лечения антибиотиками).
Аналогичное сочетание у леченного пациента при неизменном титре РМП, отсутствии IgM-АТ и наличии IgG-АТ может свидетельствовать о следовом характере процесса (иммунологическая память, идиотип-антиидиотипические взаимодействия) и не требует подключения антибиотиков [39].
Сочетание РМП+; ИФАсат+; М+; G+ у леченного пациента при неизменном титре РМП, наличии определяющихся IgM и IgG-АТ может свидетельствовать о сохранении в организме пациента патогенной бледной трепонемы и требует подключения антибиотиков.
Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что проблемы в серологической диагностике сифилиса существуют. Это обусловлено многообразием применяемых тестов, различиями в их чувствительности и специфичности, комплексностью диагностики и другими причинами. Вместе с тем эти проблемы нельзя считать неразрешимыми. Залогом успешного решения проблем серодиагностики сифилиса является знание закономерностей иммунологического ответа при данной инфекции, а также знание особенностей различных тестов, тактики их использования, правильность интерпретации и, несомненно, наличие клинического мышления у специалистов-дерматовенерологов и врачей клинической лабораторной диагностики.
1 Преаналитический этап включает сбор врачом анамнеза пациента, оценку клинической симптоматики, а также подготовку больного к обследованию, сбор, хранение и доставку биологического материала.
2 Аналитический этап подразумевает проведение исследований в лаборатории.
3 Постаналитический этап подразумевает регистрацию результатов исследований в лабораторных журналах или в электронном виде, клиническую интерпретацию результатов и установление диагноза с использованием полученных результатов.
5 Аналитическая чувствительность — способность метода обнаруживать минимальное количество искомого вещества или наименьшие различия между двумя концентрациями исследуемого вещества.